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新聞動態(tài)

液相色譜(HPLC)如何選擇色譜柱

分類:新聞動態(tài)點(diǎn)擊:492 發(fā)布時間:2024-05-20 10:45:17

HPLC高效液相色譜柱包含與支持材料鍵合的固定相(通常為多孔硅膠顆粒),以提供較大的表面積。固定相為樣本組分的分離提供了基礎(chǔ)。

樣本的物理化學(xué)特性、固定相化學(xué)組成、流動相組成、流速和色譜柱溫度決定了組分通過色譜柱的速率。研究人員可從各種固定相化學(xué)組成和色譜柱尺寸(如長度、內(nèi)徑和支持粒徑)中進(jìn)行選擇。 

色譜柱類型

固定相

流動相

應(yīng)用

反相 (RP)

非極性,如 C18 或苯基

水和極性有機(jī)溶劑的混合物

占 HPLC 分離的大多數(shù)

正相 (NP)

極性,如未結(jié)合硅膠

低極性有機(jī)溶劑的混合物

不溶于水的樣本和異構(gòu)體

親水作用 (HILIC)

極性,如硅膠或酰胺鍵合相

水和非極性有機(jī)溶劑的混合物

反相液相色譜分析對高極性樣品的保留較差

離子交換 (IEX)

可離子化基團(tuán)

通常為鹽加緩沖液的水溶液

可離子化樣本和大生物分子

離子對

非極性反相色譜柱

非極性條件加離子配對試劑

反相對酸或堿的保留較差

手性

手性基團(tuán),如多糖或環(huán)糊精

分析物和 SP 依賴物,可以是 RP、NP、極性有機(jī)物等

對映體(如外消旋藥物混合物)的分離/純化

疏水相互作用 (HIC)

非極性,短烷基鏈或苯基

高鹽緩沖液梯度,非變性條件

蛋白質(zhì),通常為抗體

體積排阻 (SEC)

惰性色譜柱,如右旋糖酐聚合物

與含水或有機(jī)流動相配合使用

大生物分子或合成聚合物


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